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高解析Orbitrap質譜儀串聯液相層析暨晶片電泳分析系統(CE/LC-MS;毛細管電泳串聯質譜儀)

 

儀器照片
一、儀器設備說明

高解析Orbitrap質譜儀串聯液相層析暨晶片電泳分析系統(CE/LC-MS;毛細管電泳串聯質譜儀)
2017年12月裝機完成,2018年3月開放服務。

廠牌及型號:

  1. Q-Exactive Plus(Thermo Fisher Scientific)高解析度軌道阱質譜儀
  2. Zipchip毛細管電泳整合型游離源(908Devices)
  3. Ultimate 3000 UHPLC System超高壓液相層析系統

儀器規格:

  1. 高解析四極桿傅立葉轉換電場軌道質譜儀(High Resolution Q-Exactive Plus)
    儀器設計:同時包含四極桿式(Quadrupole)及傅立葉轉換電場軌道阱(Orbitrap)分析器。
    (1) 離子傳輸元件(Ion Optics):
         ►具有S-LENS 設計,有效提高傳輸效率
         ►包括可獨立加熱式離子毛細管(Ion transfer tube)
    (2) 四極桿分析器:
         ►為HyperQuad mass filter
         ►Isolation width selection from 0.4 Da to full mass range
    (3) 真空系統(Vacuum System):包括渦輪幫浦(turbo pump)及旋轉幫浦(rotary pump),真空度可達 ≦ 1x10-9mbar。
  2. 超高壓液相層析系統(UHPLC Systems)
    儀器設計:同一模組內,具有兩種不同流速範圍之幫浦,奈升級幫浦NanoPump與毫升級幫浦MicroPump一組。具備自動進樣系統及管柱恆溫箱。經由串接加熱式電噴灑游離源(H-ESI)及奈升級電噴灑游離源(NSI)方式,導入質譜儀中,執行超高壓液相層析串聯質譜儀檢測功能。
    (1) 可使用Xcalibur 軟體控制。
    (2) 自動進樣系統AutoSampler 溫控範圍4-45℃。
    (3) 管柱恆溫箱Column Compartment 溫控可達75℃。
    (4) 奈升級幫浦NanoPump 耐高壓 >11,000psi。
    (5) 毫升級幫浦MicroPump 耐高壓達8,500psi。
  3. 離子源(Ion Source)
    儀器設計:
    加熱式電噴灑游離源(H-ESI):流速範圍可達1 µL/min至1 mL/min,加熱可達450℃。
    奈升級電噴灑游離源(NSI):流速範圍可達10 nL/min至1,000 nL/min,在大氣壓力模式下操作。
    毛細管電泳整合型離子源(ZipChip):分析晶片系統結合電噴灑離子源、毛細管電泳分析晶片。
  4. 檢測器(Detector)
    (1) 具全質量掃描(Full Scan MS)。
    (2) 二次全質譜質量掃描(Full Scan MS/MS)。
    (3) 具選擇離子監控(target Selected Ion Monitoring,t-SIM)、數據依賴擷取法(DDA)、非數據依賴擷取法(DIA)、全離子碎片法(AIF)、平行反應監測法(Parallel Reaction Monitoring,PRM)等功能。
    (4) 質量範圍(Mass Range):質量範圍設定m/z 50~8,000。
    (5) 掃瞄速率(Scan Rate):≦12 Hz。
    (6) 質量分辨率(Mass Resolution):最高可達280,000 FWHM 解析度。
    (7) 極性切換(Polarity Switching):正負離子切換 <1 sec。
    (8) 質量精確度(Mass Accuracy):質量外校誤差(external error)<3 ppm,質量內校誤差(internal error)<1 ppm。
    (9) Multiplexing 技術可同時選擇最多10 個 Using Ion-Routing Multipole 10 precursors。
    (10) 裂解技術:更高能量碰撞誘導解離(HCD)。
    (11) 靈敏度(Sensitivity):注入30 fg 標準品(Buspirone) on column,SIM mode 靈敏度訊噪比(S/N)>100。
二、服務項目
一般分析或定性分析項目:
  1. 分子量測定:以質譜測定純化過的化合物分子量。
  2. 單一成分高解析ESI-MS/MS:以質譜測定純化過的化合物分子量及二次質譜圖(可包含in-source CID測試或量測)。
  3. 額外選定離子ESI-MS/MS:以質譜測定指定離子的二次質譜圖。
  4. LC-MS分析(大、小分子):
    (1) 跑40min LC分離梯度,並連接質譜偵測 (Full-MS, DDA, or DIA)。(樣品需先純化)
    (2) 跑1hr LC分離梯度,並連接質譜偵測 (Full-MS, DDA, or DIA)。(樣品需先純化)
  5. ZipChip CE-MS 分析:以ZipChip進行毛細管電泳分離,並連接質譜偵測。(樣品需先純化)。
  6. 蛋白質身分鑑定分析:以Nano LC-MS/MS 或 ZipChip CE-MS分析蛋白質。
  7. 蛋白質藥物結構分析:使用LC-MS 或 ZipChip CE-MS分析,包含
    (1) Full sequence
    (2) N- or C-terminal sequence
    (3) Disulfide linkage
    (4) N-glycosylation sites and glycan structures
    (5) O-glycosylation sites and structures
    (6) Post-translational modification: such as deamidation and oxidation
定量分析項目:
  1. LC-PRM或LC-SIM定量分析(LC-MS/MS平行反應或目標性選擇離子監測法):以LC-MS/MS 進行平行反應監測(Parallel Reaction Monitoring)或目標性掃描(Selective Ion Monitoring)二次質譜等數據進行定量。
  2. 建立定量方法及檢量線:應用分析設備串聯質譜建立定量方法及檢量線。
  3. 蛋白質體定量(雙甲基標定):胜肽N端的胺基及離胺酸殘基之ε胺基經由甲醛反應與氰硼氫化鈉(NaBH3CN)還原,最後形成二甲基胺,使其分子量增加28 Da;標定樣品混合後,以質譜儀進行分析,取得定量資訊。
其它:
  1. 資料庫搜尋:將Protein ID分析所得peptide fragmentation data數據進行database search。
  2. ZipTip desalting:使用ZipTip進行去鹽濃縮。
  3. In gel digestion:對蛋白質進行 tryptic digestion。
三、送樣應注意事項
  1. 本儀器不分校內校外,一律公開開放使用,並依照科技部相關管理規則辦理。
  2. 本分析服務單位不接受放射性或生物感染性樣品。
  3. 可接受樣品之儲存狀態有:粉末狀態、水溶液狀態。
  4. 樣品中禁止含有界面活性劑、磷酸、硫酸、無機酸鹽類或非揮發性鹽類;若因送測樣品中含此類物種而造成機器損害,送測者須負相關賠償責任。(膠內酵素水解樣品最後需經C18 cartridge或是ZipTip去鹽,才可送至本分析單位進行分析。)
  5. 蛋白質、胜肽分子量測定或是蛋白質鑑定之樣品(膠體消化樣品、水溶性消化樣品)建議總量為5~100pmole。小分子測定之樣品需有1mg以上的樣品進行分析。
  6. 進行蛋白質鑑定之樣品,請註明樣品來源種類(例如:human、rattus...等)。
  7. 本實驗室一律以-20℃儲存送測樣品,如需其它特殊儲存方式請另行告知。
  8. 本分析服務單位不負責於運送過程中的損害。
四、收費辦法及標準(如與科技部貴重儀器資訊管理系統中的標準有差異,則以科技部貴重儀器資訊管理系統為主)
一般分析或定性分析項目:
  1. 分子量測定:1,300元/one sample
  2. 單一成分高解析ESI-MS/MS:1,800元/one compound
  3. 額外選定離子ESI-MS/MS:500元/one selected ion
  4. LC-MS分析:
    (1) 40min LC梯度,並連接質譜偵測:2,500元/one inj.
    (2) 60min以上LC梯度,並連接質譜偵測:3,700元/one inj.
  5. ZipChip CE-MS 分析:4,000元/one inj.
  6. 蛋白質身分鑑定分析:3,200元/one inj.
  7. 蛋白質藥物結構分析:另議。
定量分析項目:
  1. LC-PRM或LC-SIM定量分析:3,200元/one inj.
  2. 建立定量方法及檢量線:8,000元
  3. 蛋白質體定量(雙甲基標定):另議。
其它:
  1. 資料庫搜尋:2,000元/one sample
  2. ZipTip desalting:300元
  3. In gel digestion:1,000元/one sample

優惠:

種類
大宗
樣品
  優惠  
項目
 MW測定、蛋白質ID分析(全額自費者)*...........第6件以上每件88折優惠
 凡進行各定性、定量分析及資料庫比對.................第11件以上每件75折優惠
優惠
事項
 請提供樣品資訊,甚至層析條件。
資料庫
搜尋
優惠
項目
 第2次重複實驗、第2種搜尋條件、全額自費第2件*........................88折優惠
 第3次重複實驗、第3種搜尋條件、全額自費第3件以上...........每件75折優惠
優惠
事項
 搜尋結果以提供csv檔為主。
論文
致謝
優惠
項目
 每1篇SCI收錄期刊接受發表之論文(提及本儀器者)...........可抵扣6件樣品
優惠
事項
 論文提及NCKU Instrument Center Orbitrap MS (or CE/LC-MS)者,第一作者或通訊作者可在刊登後1年內申請儀器優惠。
 範本:
 The authors gratefully acknowledge   Orbitrap MS (CE/LC-MS) belonging   to the Instrument Center of NCKU.
五、聯絡方式
  姓名 電話 電子郵件
儀器專家 陳淑慧教授 06-2757575 轉 65339 shchen@mail.ncku.edu.tw
技術員 蘇柏榕先生 06-2757575 轉 31360 再轉 213 或 212 z10704004@email.ncku.edu.tw
樣品寄送 地址:70101 臺南市東區大學路1號 國立成功大學 貴儀中心 0102室    收件人:蘇柏榕先生
六、儀器放置地點
國立成功大學自強校區儀器設備大樓1樓0102室
七、申請表格及注意事項
八、參考資料
九、相關儀器

 

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